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國立臺灣海洋大學 食品科學系 潘崇良所指導 林慧傑的 Pseudomonas vesicularis MA103 所產 Alginate lyase pal III 之基因轉殖至大腸桿菌中表現之探討 (2009),提出何謂固定價金關鍵因素是什麼,來自於褐藻膠裂解酶 pal III、無限制酶基因選殖法。

最後網站工程契約(一)-性質(依價金給付方式分類) - 上善律師事務所則補充:所謂依契約總價給付,係指承包商完成圖說及契約約定數量之工作後,除非有發生不可抗力之事件或辦理變更設計增減數量外,業主即給付固定金額之報酬, ...

接下來讓我們看這些論文和書籍都說些什麼吧:

除了何謂固定價金,大家也想知道這些:

通膨、美元、貨幣的一課經濟學

為了解決何謂固定價金的問題,作者HenryHazlitt 這樣論述:

錢 越來越不值錢...... 政府別再印鈔票了!   2008金融風暴以來,各國都採寬鬆貨幣政策,壓低利率,一旦景氣反轉,十分可能引發「通膨」!   「通膨」這個名詞在財經新聞中隨處可見,彷彿它是洪水猛獸,彷彿大眾很了解它,但其實對它的了解少之又少,又充滿誤解。   到底何謂通貨膨脹(inflation)?   暢銷書《一課經濟學》作者亨利.赫茲利特,在本書中徹底解析通貨膨脹現象,它如何發生?如何解決?誰獲利?誰受害?   這本書從通膨與物價、金價、貨幣供給量、工資率、失業率的相互影響關係,到金融體系的穩定性、金本位制度的優點,做了廣泛而清晰的解釋。   作者是

經驗豐富、備受推崇的經濟專業記者,長年在《紐約時報》、《新聞週刊》撰寫經濟評論,教育了數百萬讀者了解經濟學的入門知識。他在本書一開頭就提到:   事實上,通貨膨脹就是「貨幣及信用供給的增加」。如果你去查辭典,你會發現通貨膨脹的第一個定義是:「一國貨幣(currency)不適當地擴張或增加,特別是以發行無法兌換回金銀幣的紙幣形式來增加。」而第二個定義才是:「肇因於紙鈔或是銀行信用不適當的擴張,所導致的物價大幅上漲。」   所以,「物價上漲」只是通貨膨脹的一個結果而已,只是一般媒體常常將兩者混為一談。想要了解通膨對總體經濟的各種效應,了解「通膨和貨幣的經濟學」,本書是最佳的參考書籍。

Pseudomonas vesicularis MA103 所產 Alginate lyase pal III 之基因轉殖至大腸桿菌中表現之探討

為了解決何謂固定價金的問題,作者林慧傑 這樣論述:

  本研究探討 Pseudomonas vesicularis MA103 經誘導產生褐藻膠 裂解酶 (Alginate lyase) 的純化,及藉 N 端胺基酸定序結果比對, 確認該 Alginate lyase 之完整基因序列;由已知的菌株 MA103 基因 體序列中挑選一 Alginate lyase pal III 基因,以無限制酶基因選殖法 (Restriction-free, RF cloning) 轉殖至大腸桿菌中,並觀察其 Alginate lyase rpal III 之酵素活性。以含有 0.2% Sodium alginate 的 Marine broth (MB)

和 Modified marine broth 2-alginate lyase (MMB2-Al) 培養基進行誘導 培養,可有效提高菌株 MA103 crude alginate lyases 的活性,經活性染色和 SDS-PAGE 確認誘導培養可產生兩個 Alginate lyase,由膠片結果推估其分子量大小分別約為 57 和 38 kDa。其粗酵素液以 DE-52 離子交換樹脂層析初步純化,可分離出兩個具有 Alginate lyase 活性的蛋白質波峰,個別收集後命名為 Pv-Al-1 及 Pv-Al-2,其比活性分別為 1142.22 U/mg 和 531.76 U/mg。

以 12% SDS-PAGE 分析後得知,Pv-Al-1 與 Pv-Al-2 中仍有部分雜蛋白,需進一步以膠體過濾層析管柱純化;另一方面,從已完成定序的MA103 genomic DNA 中得知有 4 個可能產生 Alginate lyase 的基因片段, 挑選一段核苷酸序列全長為 1041 bp 之 Alginate lyase pal III,可轉譯出 348 個胺基酸,使用 pET 表現系統以及 RF cloning 方法設計兩組引子對,並以 PCR 製得插入 Alginate lyase pal III 基因之重組載體 pET-21b (+) 的 PCR 擴充產物,核苷酸序列全長約為

6500 bp,該 重組載體經電穿孔法轉殖至 E. coli BL21 (DE3) 後,將其載體上之 插入序列定序,其定序結果顯示 rpal III 與 pal III 除了因設計方便 後續純化而剔除的 stop codon 之外,其餘的序列皆相同。經 Isopropyl -D-1-thiogalactopyranoside (IPTG, 0.5 mM) 於 20oC 下 誘導 3 小時後,胞內粗酵素液可得到最高酵素活性 (21.06 U/mg protein),該胞內粗酵素液經由鎳親和性管柱層析處理後,得到純化之 Alginate lyase rpal III (487.50 U/m

g protein),此純化酵素液之 SDS-PAGE 結果顯示,其分子量約為 40.5 kDa,與 rpal III 基因序列所推估的大小相似;在基質特異性方面 Alginate lyase rpal III 對於 Alginic acid 具有較高的酵素活性 12.41 U/mL。此外,除了對重緣葉馬尾藻熱萃液約略具有酵素活性 (0.43 U/mL) 外,對於其他的藻類熱萃液則無顯著的酵素活性產生。從 TLC 的分析中得知,Alginate lyase rpal III 在 25oC 與 pH 9.0 中將 Alginate 水解 24小時後所得到的褐藻膠寡醣,與 Zhang et al.

(2005) 所發表的文獻數據相比對,推測其水解產物的聚合度 (Degree of polymerization, DP) 可能為 DP4 或 DP5 的褐藻膠寡醣; 而以 MA103 crude alginate lyase 在相同條件下將Alginate水解 24 小時,觀察到四種不同的褐藻膠寡醣產生,其聚合度可能在 DP4-DP8 之間。而從 HPLC 的分析結果得知 Alginate lyase rpal III 與 MA103 crude alginate lyase 在水解 Alginate 24 小時後,分別可能得到兩種和四種褐藻膠寡醣水解產物。未來會進一步將該褐藻膠寡醣分離純

化後,再以 NMR 鑑定其褐藻膠寡醣的結構。