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國立陽明大學 臨床醫學研究所 牛道明所指導 劉寶洵的 利用法布瑞氏症小鼠模式探討早期腎臟病變及纖維化發生時序 (2019),提出deficient用法關鍵因素是什麼,來自於法布瑞氏症、腎病、足細胞。
而第二篇論文國立陽明大學 生命科學系暨基因體科學研究所 陳俊銘所指導 陳宗煒的 建立小鼠與人類子宮內膜類器官之培養系統 (2019),提出因為有 子宮肌腺症、子宮內膜異位症、子宮內膜癌、類器官的重點而找出了 deficient用法的解答。
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利用法布瑞氏症小鼠模式探討早期腎臟病變及纖維化發生時序
為了解決deficient用法 的問題,作者劉寶洵 這樣論述:
法布瑞氏症是一種X性聯遺傳的溶媒體儲積症(X-linked lysosomal storage disease),起因於GLA基因發生突變,導致患者無法轉譯出具有正常功能的GLA酵素(a-galactosidase A),使得細胞中的鞘糖脂(globotriaosylceramide, Gb3)無法正常被代謝,進而堆積在細胞的溶酶體中造成心臟、腎臟或神經等方面的病變。目前法布瑞氏症在全球的發生率約 1/50,000,而我們團隊透過新生兒篩檢的方式,發現國人心臟變異型法布瑞氏症基因突變點(GLA IVS4+919 G>A)位點的突變率(約1/1471)遠高於全球,更凸顯了法布瑞氏症在台灣的重要
性。 目前主要的治療方式為酵素替代療法(Enzyme replacement therapy,ERT),注射GLA酵素進入患者體內循環且清除溶酶體中所堆積的Gb3,然而目前的治療方式依然存有諸多限制。有文獻指出酵素替代療法無法有效改善腎絲球過濾率,接受治療的患者其過濾率依然會隨年齡增長而下降,除此之外也發現ERT無法清除足細胞中的Gb3堆積,這些研究顯示ERT對於腎臟功能的回復有限,推測在腎臟受嚴重傷害前給予治療會有更好的預後,然而目前對於法布瑞氏症腎臟的病程變化還未明瞭。法布瑞氏症研究中廣泛使用Gla基因剔除小鼠作為法布瑞氏症動物模式,但其小鼠的表現型症狀較輕、發病時間晚,不容易看出病
徵。然而在實驗室先前的研究,發現G3S基因轉殖法布瑞氏症小鼠發病時間較早,且存活率明顯低於Gla基因剔除小鼠,其Gb3主要堆積在腎臟,但Gb3堆積對於腎臟病變的影響還有待探討。 在本篇論文中,我們利用不同週齡的法布瑞氏症小鼠,觀察其腎臟中Gb3的堆積情況,也透過組織染色觀察病理現象,發現法布瑞氏症病徵小鼠在30週時在腎臟皮質出現白血球浸潤現象,且有大量結締組織。因此,推測小鼠腎臟已出現嚴重纖維化的現象。另外儘管法布瑞氏症病徵小鼠在10週時有大量Gb3堆積和蛋白尿的症狀,但透過蘇木素-伊紅染色及馬森三色染色皆沒有觀察到組織異常的情況,雖然此時足細胞數量上並沒有差異,不過腎絲球的過濾屏障蛋白
nephrin表現量明顯下降。除了現今ERT的治療方式之外,實驗室先前研究利用AAV9包裹GLA的方式可以提高循環中的酵素活性,並進入心臟和腎臟當中清除Gb3的堆積改善蛋白尿的現象,因此我們測試利用 AAV 基因治療的方式是否可以將GLA酵素蛋白送入足細胞,並改善nephrin表現量,儘管AAV基因治療能顯著回復nephrin的結構,但不管是酵素替代療法或AAV的方式,其GLA酵素皆無法順利進入足細胞中,而大量表現在腎臟髓質的區域。 綜合本研究之實驗結果,推測Gb3堆積的毒性影響足細胞過濾屏障結構,可能是導致蛋白尿產生的原因之一,另外透過對於法布瑞氏症病徵小鼠腎臟病程的變化,希望可以提供
未來治療法布瑞氏症腎病的時間點和策略方向,進而提升腎臟治療成效。
建立小鼠與人類子宮內膜類器官之培養系統
為了解決deficient用法 的問題,作者陳宗煒 這樣論述:
子宮肌腺症和子宮內膜異位症都是女性在生殖年齡常見的婦科疾病。在近年來的研究中指出,這些疾病與不孕症、子宮內膜癌具有一定的相關性。目前能完全根治子宮肌腺症與子宮內膜異位症的方法只有子宮切除術,這個治療方法對處於生育年齡的婦女傷害是很大的。然而,由於缺乏合適的研究模型,導致對於這些疾病分子與細胞層面的調控所知甚少。因此為了模擬此類疾病在體內的環境,我們選用三維類器官培養(3D organoid culture)的方式,建立合適的研究平台。在此研究中,我首先利用K18-EGFP/K8-CreERT;R26R-tdTomato母鼠的生殖器官建立類器官培養系統,且在4-羥基泰莫西芬(4-hydroxy
tamoxifen, 4-OHT)的誘導下,在此類器官中的tdTtomato報告基因(reporter gene)確實能夠被活化。另外我們也利用K18-EGFP/K8-CreERT將抑癌基因Trp53和Pten剔除,希望以此模擬腫瘤類器官的發展。有了建立小鼠類器官的經驗後,我也從有婦科疾病的病人檢體中取樣並建立類器官培養系統。目前我們已經成功從正常的子宮內膜、子宮肌腺症、子宮內膜異位症以及子宮內膜癌之檢體培養出類器官。因此,我可以利用此三維類器官培養的系統進行如組織切片染色、生長因子依賴性測試、類器官異種移植等分析,做為日後研究婦科相關疾病的研究平台。
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