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國立高雄科技大學 海洋生物技術系 張瑞璋所指導 黃政儒的 耐鹽性乳酸菌細菌素的純化與生物活性特性評估 （2018），提出Lung protective stra關鍵因素是什麼，來自於益生菌、乳酸菌、細菌素、生物活性。
而第二篇論文國立臺灣大學 獸醫學研究所 張照夫所指導 姜臺生的 Actinobacilluspleuropneumoniae之毒素及外膜蛋白基因之選殖與其重組蛋白之免疫試驗 （2000），提出因為有 胸膜肺炎放線桿菌、細胞毒素、運鐵結合蛋白、外膜脂蛋白、疫苗試驗的重點而找出了 Lung protective stra的解答。
耐鹽性乳酸菌細菌素的純化與生物活性特性評估
為了解決Lung protective stra 的問題，作者黃政儒 這樣論述：
摘 要 IIIAbstract V目 錄 VII圖目錄 XI表目錄 XIII前言 151. 文獻回顧 161.1. 益生菌 161.1.1. 定義 161.1.2. 分類 161.1.3. 益生菌作用機制 181.1.4. 理想的益生菌 191.1.5. 益生菌商業形式 201.1.6. 益生菌的健康益處 201.2. 乳酸菌 201.2.1. 乳酸菌基本特性 201.2.2. 乳酸菌（Lactic acid bacteria, LAB）分類 211.2.2.1 Lactococcus (乳酸球菌屬) 211.2.2.2 Lactobacillus
(乳酸桿菌屬) 221.2.2.3 Pediococcus (片球菌屬) 221.2.3. 乳酸菌對人體之健康機能 231.2.3.1 抑制病原菌與維持腸道菌叢平衡 231.2.3.2 合成維生素與提供營養 241.2.3.3 改善乳糖不耐症 241.2.3.4 降低血中膽固醇 251.2.3.5抗腫瘤的效果 251.2.4 乳酸菌抑菌物質的種類 251.2.4.1有機酸的產生與pH值的降低 261.2.4.2過氧化氫 (H2O2) 對乳酸菌的影響 261.2.4.3 乳酸菌產生二氧化碳的作用 271.2.4.4. 乳酸菌產生細菌素的作用 281.2.4.5. 乳
酸菌產生胞外多醣 (EPS) 的作用 281.2.5 γ-胺基丁酸 (γ-aminobutyric acid, GABA) 281.2.5.1 乳酸菌生產GABA的生長代謝 281.2.5.2 乳酸菌生產GABA的功效 291.3 細菌素的性質與分類 291.3.1. 細菌素的基本特性 301.3.1.1. 起源 311.3.1.2. 分類 321.3.3 細菌素純化 341.3.4 細菌素的抑菌機制 341.3.5. 細菌素的應用性 361.3.5.1. 食物保存的應用 361.3.5.2. 呼吸道感染及口腔護理 371.3.5.3. 殺精劑和女性照護的應用 37
1.3.5.4. 動物醫療的應用 381.3.5.5. 皮膚護理的應用 381.4 細菌素的抗氧化活性 391.4.1. 自由基氧化作用 391.4.2. 超氧自由基 391.4.3. 單重態氧 401.4.4. 過氧化氫 401.4.5. 羥基自由基 401.5 抗氧化劑 411.5.1. 抗壞血酸 411.5.2. 酚類抗氧化物 421.6 抗氧化活性的測定原理 421.6.1. DPPH清除自由基能力測 421.6.2. TEAC總抗氧化能力測定 421.6.3. 還原力能力測定 441.6.4. 亞鐵離子螯合能力測定 441.7 酪胺酸酶抑制活性測定及應
用 451.7.1 酪胺酸酶抑制活性測定 451.7.2 食品工業的應用 451.7.3 化妝品工業 461.8. 細菌素與癌症 471.8.1.腸癌 481.8.2. 肝癌 491.8.3. 發炎反應 491.9. 細胞凋亡 501.9.1細胞活性測定方法 501.9.1.1. 細胞冷凍保存 501.9.1.2. 冷凍細胞活化 511.9.1.3. 細胞繼代 511.9.1.4. 細胞存活率分析 512. 材料與方法 532.1. 實驗架構 532.2. 藥品與材料 542.2.1. 實驗藥品 542.2.2. 實驗儀器 552.2.3. 培養基 56
2.2.4. 細胞株 572.2.5 病原菌 582.3. 乳酸菌篩選及純化 592.4. 16s rRNA菌種鑑定 592.4.1. 革蘭氏染色 592.4.2. 觸酶測試 602.4.3. 乳酸菌的有機酸抑菌活性試驗 602.4.4. 過氧化氫排除法 602.5. 乳酸菌生長特性 602.5.1 溫度對乳酸菌生長和抑菌活性的影響 602.5.2 碳源對乳酸菌生長和抑菌活性的影響 612.5.3. 不同培養天數的生長曲線和抑菌活性 612.5.4. 酸鹼對乳酸菌生長和抑菌活性的影響 612.5.5. 不同鹽度的生長曲線和抑菌活性 612.5.6. 乳酸菌腸胃耐受性
試驗 622.5.7. 乳酸菌產生GABA的試驗 622.6. 細菌素萃取及純化 622.6.1 萃取後活性確認 622.6.2 分子篩純化 632.6.3 蛋白質定量 632.6.4. 細菌素分子量測定 632.7 細菌素生化特性 642.7.1. 不同酵素對細菌素活性抑菌活性的影響 642.7.2. 溫度對細菌素的影響 642.7.3. 細菌素pH值穩定性試驗酸鹼值對細菌素的影響 642.7.4. 界面活性劑對細菌素的影響 652.8. 細菌素生物活性分析 652.8.1. 抑制病原菌活性 652.8.1.1. 病原菌洋菜膠擴散法 652.8.1.2. 最小
抑菌濃度(minimum inhibitory concentration)及最小殺菌濃度(minimum bactericidal concentration) 662.8.2. 細菌素抗氧化活性測定 662.8.2.1. DPPH清除能力 662.8.2.2. TEAC總抗氧化能力 662.8.2.3. 還原能力 672.8.2.4. 亞鐵離子螯合能力 672.9. 酪胺酸酶抑制 682.10. 膠體過濾層析法 682.10.1 管柱充填 682.10.2. 樣品製備 692.10.3. 管柱層析 692.10.4. 胜肽含量測定 692.11. 細胞實驗 692
.11.1. 細胞培養 702.11.2. 腸癌細胞之黏附力 702.11.3. 細胞毒殺活性試驗 (MTT assay) 702.12. 高效能液相層析法 712.12.1. 樣品前處理 712.12.2. 高效能逆向層析條件 712.12.3. 胺基酸序列分析與鑑定 712.13. 細菌素基因的篩選 712.13.1. 核酸洋菜膠電泳 722.13.2. 核酸片段回收與純化 722.13.3. 核酸接合反應 732.13.4. 製備勝任細胞 732.13.5. 熱休克轉型反應 732.13.6. 藍白篩選 742.13.7. 質體 DNA ( p
lasmid DNA ) 之萃取及 DNA序列分析 742.13.8. 序列比對 752.13.9. 胜肽合成 752.14. 統計分析 753. 結果 764. 結論 87參考文獻 90
Actinobacilluspleuropneumoniae之毒素及外膜蛋白基因之選殖與其重組蛋白之免疫試驗
為了解決Lung protective stra 的問題，作者姜臺生 這樣論述：
選殖胸膜肺炎放線桿菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae) 第 1、5 血清型外膜脂蛋白 (outer membrane lipoprotein A, OmlA)，第 1、5、7 血清型運鐵蛋白結合蛋白 (transferring binding protein 2, Tbp2) 與細胞毒素 (Actinobacillus pleruopneumoniae toxin, Apx) I、II、及 III 基因，選殖到 pCR-TOPO 載體。再次選殖到 pKK223-3、pGEX-4T-2、及 pEXT20 表現載體，以表現脂蛋白及融合蛋白。
外膜脂蛋白的訊息序列 (signal sequence) 會影響重組蛋白表現產量及對勝任細胞產生毒性。勝任細胞表現第 1、5 血清型的外膜脂蛋白及第 1、5、及 7 血清型的第 2 運鐵蛋白結合蛋白之重組蛋白質不會形成聚集 (aggregate formation)，但第 1、5 血清型的第 2 運鐵蛋白結合蛋白大部分呈不可溶性，會形成包涵體聚集 (aggregation of inclusion body)。ApxI、ApxII 於 pKK223-3 載體表現良好，但 ApxIII 於 pEXT20 載體表現產量不好。進行免疫轉漬試驗分析，發現感染第 5 血清型之恢復豬血清對同血清型的第 2
運鐵蛋白結合蛋白及外膜脂蛋白產生很強的免疫反應， 而與第 1 血清型的外膜脂蛋白則產生中等免疫反應，與第 1、7 血清型的第 2 運鐵蛋白結合蛋白產生微弱的免疫反應 。所有的蛋白質很穩定，可於 —20 ℃ 下保存 3 個月。以 ApxI、ApxII 製備次單位疫苗，進行疫苗試驗，結果對豬隻之肺臟具保護能力，較市售疫苗有顯著差異。