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優化美鐵芋體胚苗轉化技術與變異體選拔

為了解決Business leaflet tem的問題，作者廖育欣 這樣論述：

本研究旨在改善美鐵芋胚苗轉化之效率以及不定芽再生體之誘變育種。美鐵芋葉培植體經誘導並衍生之體胚團塊，挑取直徑約1.5-2 cm之體胚團塊並二分切，培養於1/2 MS(Murashige和Skoog)並添加8%蔗糖處理，經5週培養，可得3.2個盾片胚到子葉鞘胚形成，體胚成熟率達68%最佳。分析蔗糖處理顯示，8%蔗糖處理可加速初期體胚成熟，主要利用之可溶性糖以葡萄糖、果糖與蔗糖為主，而以蔗糖含量最高；但體胚發育至12週以後則以4%蔗糖處理體胚品質較佳。另測定不同蔗糖濃度處理之胚體組織內可溶性糖與澱粉含量，隨著蔗糖處理濃度的上升其可溶性糖與澱粉含量隨之增加。此外，取直徑約1.5-2 cm之美鐵芋葉

成熟體胚團塊，二分切後培養於1/2 MS添加2%蔗糖與1%葡萄糖作為基礎培養基，測試生長調節劑處理與培養方式條件，經固態培養8週對胚苗轉化影響，顯示以0.5 mg•L-1 TDZ(thidiazuron)組合0.25 mg•L-1 BA(6-benzyladenine)處理，其胚苗轉化率為90%，體胚發芽數為2.7個為最佳處理。GA3(gibberellins A3)組合TDZ，則以2 mg•L-1 GA3組合1 mg•L-1 TDZ，胚苗轉化率為90%，平均可獲得3.1個體胚發芽為佳。為進一步改善成熟體胚發芽並轉化至胚苗的品質，於8週固態培養後，移至液態震盪培養2週，以0.1 mg•L-1

TDZ組合0.25與0.5 mg•L-1 BA、0.25 mg•L-1 TDZ組合0.25 mg•L-1 BA及0.5 mg•L-1 TDZ組合0.25 mg•L-1 BA處理，胚苗轉化率為100%，平均體胚發芽數為介於2.9-3.9個。2.0 mg•L-1 GA3組合1.0 mg•L-1 TDZ處理有4.0個體胚發芽數為最佳處理。結果顯示以液體懸浮培養有助於體胚芽體形成，形成具有完整形態雙極性之小植株。美鐵芋不定芽形成之變異體選拔，將具有斑葉之葉斷片培植體以2 mg•L-1 TDZ處理有50%芽體形成率，可獲得2.3個芽體為最佳處理。叢生芽體其葉鞘具有黃綠色或粉色鑲嵌條紋，再生變異枝梢可產生

綠色葉帶有少許黃色色澤，以及主脈為綠色之黃色葉片。以不同疊氮化鈉(sodium azide, NaN3)濃度與浸泡時間對美鐵芋葉培植體之誘變影響，結果顯示隨著疊氮化鈉濃度及浸泡處理時間增加，培植體的存活率越低。培養4週後，以3 mM疊氮化鈉濃度處理240 min約達半致死劑量(45%)。培養12週後，0和1 mM疊氮化鈉處理240 min，芽體形成率分別為75%與50%，其芽體數量為2.3與1.5個為較佳處理。葉色變異枝梢於小葉完全展開時進行觀察，疊氮化鈉1與2 mM浸泡240 min處理有50%變異率為最佳，經疊氮化鈉藥劑處理獲得綠葉、綠黃色葉以及黃化葉之再生植株。而隨著疊氮化鈉濃度的增加，

枝梢數與根葉生長量皆漸降，而相對葉綠素含量之SPAD(soil and plant analyzer development)值亦低，其中以2 mM處理240 min為18.6最低。